Bioss 抗體的使用和保存方法
抗體,無論是保存還是運(yùn)輸,都要避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融,冰晶會(huì)破壞抗體的空間結(jié)構(gòu),導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體,從而降低抗體的結(jié)合能力,也加快了抗體球蛋白的降解速度??贵w保存得當(dāng)與否,直接決定了抗體的活性和使用效果,如果抗體保存得當(dāng),Bioss的抗體活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。下面就給大家講解下,Bioss抗體的使用和保存方法:
一、收到抗體后的操作
收到Bioss抗體后(大部分抗體是溶液態(tài)),請(qǐng)務(wù)必在 4℃,12000rpm,離心3分鐘,再打開管蓋進(jìn)行分裝、溶解和保存(如果抗體體積小于50ul,請(qǐng)延長(zhǎng)離心時(shí)間至5 分鐘,以保證全部抗體均離心下來,干粉狀態(tài)的同樣適用)。Bioss抗體使用特制的儲(chǔ)存管,只有在12000rpm 離心3分鐘,才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來(即使是在10000rpm離心也會(huì)離心不完全,導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象)。請(qǐng)按照說明書推薦的保存條件正確保存和使用抗體。
二、抗體的長(zhǎng)期保存
對(duì)于Bioss大部分抗體,比較合適的保存方式是:分裝后保存在-20℃或者-80℃。
(1)對(duì)絕大多數(shù)Bioss抗體來說,保存在-20℃就完全足夠了。
(2)分裝可以最大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害,同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
(3)分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,最少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小,抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。
(4)復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來。
(5)抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,4℃保存盡量不要超過1天。
三、抗體的短期保存
大部分Bioss抗體,在4℃短暫保存1~2 周對(duì)抗體活性沒有影響。如果抗體很快會(huì)使用(1~2 周內(nèi)),推薦在4℃保存,這是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害,如果要長(zhǎng)期保存,則最好是在-20℃或者-80℃。最關(guān)鍵的一點(diǎn)是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體。腹水形式的抗體產(chǎn)品請(qǐng)?jiān)谑盏胶罅⒓磧銎饋?,因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長(zhǎng)期在4℃保存會(huì)導(dǎo)致抗體的降解。
四、抗體的運(yùn)輸條件
一般國(guó)內(nèi)的的運(yùn)輸過程需要2-5天的時(shí)間,是在低溫4℃的條件下來完成的。 4℃運(yùn)輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害(如果使用干冰運(yùn)輸,那么收到時(shí)抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍,這就多了一次凍融的過程),所以抗體運(yùn)輸過程中絕對(duì)避免干冰運(yùn)輸。
五、抗體的穩(wěn)定性
(1) 抗體的穩(wěn)定性是自然界長(zhǎng)期進(jìn)化的結(jié)果,抗體是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一,其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化篩選的結(jié)果,在眾多物種中,抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。
(2)抗體分子的高Tm值,在室溫下,甚至短時(shí)間溫度達(dá)到50~60℃,抗體分子都能維持正確折疊,保持其應(yīng)有的活性。
(3)抗體的純度。Bioss采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù),確??贵w產(chǎn)品的高純度,保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
(4)抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失,高濃度的抗體穩(wěn)定性更好。Bioss大部分抗體濃度為1mg/ml,抗體純度高,特異性好,效價(jià)更高。
六、關(guān)于加入甘油保存
有些人會(huì)加50%的甘油到抗體中來避免反復(fù)凍融,甘油在-20℃會(huì)降低冰點(diǎn),這對(duì)很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因?yàn)檫@已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請(qǐng)謹(jǐn)慎注意無菌操作,避免污染。
七、關(guān)于蛋白保護(hù)劑
蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解(1mg/ml 或者更高),這就是為什么在抗體中加入BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合標(biāo)記物。
八、關(guān)于Proclin300的使用
為了防止微生物污染,Proclin300經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度0.03% (w/v))。Bioss的絕大部分抗體已經(jīng)含有了0.03%的Proclin300,在說明書的儲(chǔ)存緩沖液中有標(biāo)明。
九、特殊抗體的保存條件
偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光 保存,尤其是熒光抗體,對(duì)光極為敏感,因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的。
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