本期導讀：HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。一張質(zhì)量上乘的HE切片是病理醫(yī)生得以做出正確診斷的關(guān)鍵。影響HE染色質(zhì)量的因素是多方面的。本文主要對HE染色中常見的幾個問題及其對策進行分析討論。
蘇木精——伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。
HE染色過程：
?將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。
?酸水及氨水中分色，各數(shù)秒鐘。
?流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。
?入70％和90％酒精中脫水各10分鐘。
?入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。
?染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明。
?將已透明的切片滴上加拿大樹膠，蓋上蓋玻片封固。
HE染色常見的問題及解決方法
問題1 切片呈霧狀/發(fā)灰/發(fā)白，核染色模糊
原因：①待封還潮；②蘇木素過氧化老化，冰醋酸揮發(fā)；③脫水，透明劑不良，雜質(zhì)過多；
解決方法：①空氣除濕；②蘇木素過濾后加入冰醋酸（促染劑）；③常規(guī)更換酒精，二甲苯。
問題2 染色不均
原因：①固定不充分；②高濃度酒精脫水時間過長；③浸蠟不佳；④染色時間掌握不好；
解決方法：①定期更換染色液；②用2%鐵明礬處理；③浸蠟溫度高于熔點2℃左右；④蘇木素染色鏡下控制。
問題3 細胞成分藍色，如粘液，膠原蛋白或平滑肌
原因：①蘇木素溶液過染；②分化不充分；③蘇木素溶液的PH值＞3；
解決方法：①縮短染色時間；②用1%鹽酸酒精分化2-5s，洗脫過染胞核，不應著色的組織成分；③用乙酸調(diào)節(jié)蘇木素PH值為2.5；④提高酸性酒精的濃度。
問題5 胞質(zhì)染色太深
原因：①切片在伊紅溶液中時間過長；②伊紅染色后分化不足；③伊紅染液可能過濃；
解決方法：①減少伊紅溶液染色時間，稀釋伊紅染液；②85%酒精增加分化時間。
問題6 胞質(zhì)染色太淡
原因：①伊紅染液使用時間太久；②伊紅染液的PH值＞4.5，乙醇脫水易褪色；③伊紅染液后酒精沖洗不正確；④伊紅染色時間太短；
解決方法：①更換新鮮的伊紅染液；②用濃醋酸調(diào)節(jié)伊紅染液PH值（4~4.5），伊紅PH值＜3.6，核發(fā)紫，對比不強；伊紅染液PH值＞5，染不上；③減少伊紅步驟后酒精沖洗的時間；④增加伊紅溶液的染色時間。
問題7 細胞核發(fā)紅棕色
原因：①蘇木素染色液氧化過度；②返藍不足；
解決方法：①及時更換然染液；②返藍可用流水、溫水或稀氨水、0.2%碳酸氫鈉等。
舉栗
Ⅰ 正常染色（細胞核呈藍色，細胞漿呈玫紅色，顏色分明）（腎）
Ⅱ 細胞成分藍色（胎盤）
Ⅲ 切片呈霧狀/發(fā)灰/發(fā)白，核染色模糊（胎盤）
Ⅳ 胞質(zhì)染色太深（肝）
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