產品編號 | C6135 |
英文名稱 | Mycoplasma Treatment Reagent |
中文名稱 | 支原體清除劑 |
保存條件 | -20℃保存,1年. |
注意事項 | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
產品介紹 |
產品介紹: 支原體污染是細胞培養(yǎng)中常遇到的問題。支原體污染可以改變細胞的特性,例如部分支原體會快速消耗培養(yǎng)基中的精氨酸,與細胞競爭營養(yǎng),從而使細胞的生長速度減慢或停止;同時支原體還可以改變細胞的酶譜、細胞膜成分,造成細胞染色體異?;蚣毎±硇愿淖兊取I鲜銮闆r會嚴重影響到使用這些細胞所做實驗的結果,導致結論不可靠。 本產品是復合抗生素制劑,含有兩種有效成分,分別作用于支原體的核糖體和DNA螺旋酶,抑制蛋白質的合成, 破壞細胞膜的完整性,及抑制支原體DNA的合成和復制。且所含組分可穿透哺乳動物細胞膜,可同時除去游離形式及胞內的支原體,從而確保經過處理的細胞不會被胞內釋放的支原體再次感染。使用此支原體清除劑1-2周即可殺滅90%以上的支原體,且對細胞毒副作用少。同時,本產品對革蘭氏陰性及陽性菌均有抑制作用。 操作說明: 在無菌條件下,拿一管去除試劑粉末(125mg)加入10ml滅菌水,振蕩溶解,配成100×儲存液,過濾分裝后-20°C保存。使用時按1:100的比例加至完全培養(yǎng)基中,配制成1×的工作培養(yǎng)基。 細胞傳代時,離心去除培養(yǎng)上清后,用1×的工作培養(yǎng)基正常培養(yǎng)及傳代1-2周。傳代時用PBS洗細胞1-2次可提高支原體清除效率。 建議: 1. 用本產品處理細胞至常規(guī)PCR檢測結果為陰性后,仍可能有痕量支原體殘留,應再處理1周,并繼續(xù)檢測。若檢測結果仍為陰性,可嘗試撤去試劑正常培養(yǎng)2周,同時維持檢測頻率,確保結果沒有反彈。正常培養(yǎng)2周后,若結果均為陰性,則該細胞為完全治愈,可減少檢測頻率。這樣為一個完整的治療過程。若出現反彈,細胞需要重新開始一個完整的療程。 2. 在實驗室條件允許情況下,用兩臺培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)受感染與“干凈”的細胞,在做去除處理的細胞暫時與受感染的細胞放一個培養(yǎng)箱,至檢測結果為陰性后,轉至另一培養(yǎng)箱觀察。同樣,如果條件允許,分別在不同的超凈臺處理受感染和“干凈”的細胞,耗材及試劑也應分開使用。若條件不允許,也盡可能做到受感染的、在做去除處理的與“干凈”的細胞分層放置。不同的細胞分開處理,優(yōu)先處理“干凈”的細胞,后處理在做去除的和受感染的細胞。試劑分開使用,“干凈” 的細胞優(yōu)先使用耗材,已開封但未使用完的耗材只處理受感染的細胞,盡最大可能減少交叉感染的可能性。 常見問題: 1. 為什么做去除處理后培養(yǎng)基中的黑點沒有減少? 答:目前學術界對黑點是什么尚無定論,有人認為是細胞碎片,也有人認為是無機物、真菌、 細菌甚至是黑膠蟲等等,而黑點的出現與支原體感染的相關性也沒有文獻報道。所以黑點的多少不能反映支原體的多少。 2. 為什么會出現細胞反復感染的情況? 答:支原體可以通過氣溶膠傳播,和受感染的細胞共用試劑與耗材極易產生交叉污染的問題, 從而導致剛殺滅支原體的細胞恢復正常培養(yǎng)后被重新感染。而人體的皮膚及口腔中也存在支原體,不規(guī)范的操作(如不戴手套處理細胞、操作過程中不戴口罩并隨意交談等),都很容易將剛殺滅支原體的細胞重新感染。因此,樹立嚴格的操作規(guī)范并堅持執(zhí)行才是避免細胞反復感染的有效途徑。 |
1、抗體溶解方法 | |
2、抗體修復方式 | |
3、常用試劑的配制 | |
4、免疫組化操作步驟 | |
5、免疫組化問題解答 | |
6、Western Blotting 操作步驟 | |
7、Western Blotting 問題解答 | |
8、關于肽鏈的設計 | |
9、多肽的溶解與保存 | |
10、酶標抗體效價測定程序 | |